Получение спор грибов

Как получить мицелий грибов в домашних условиях

Разведение грибов самостоятельно, дома – увлекательное и прибыльное дело, кто-то растит их для себя, другие занимаются продажей и имеют от этого хороший доход.

Но чтобы получить качественный и богатый урожай, нужна хорошая рассада, поэтому многие хотят знать, как сделать мицелий грибов в домашних условиях, и возможно ли это. Вывод мицелия – дело непростое и не всегда удачное, мы расскажем о нескольких технологиях, вы можете выбрать для себя подходящий вариант и попробовать.

Что такое мицелий?

Для начала разберемся, что же такое на самом деле являет собой мицелий грибов. Мицелием называют вегетативное тело грибницы, содержащее в себе клетки грибов. При погружении в питательную среду из мицелия начинают развиваться и расти плоды.

Визуально – это тонкие белые, бурые или желтоватые нити, сеточки, переплетения, которые называют гифами. Некоторые грибы образуют мицелий в виде пушка, похожего на вату, но если рассмотреть такой налет через лупу, то будут заметны тончайшие переплетения ниточек.

Подобные образования (гифы) часто образуются на местах отплодоносивших грибниц на пнях и в других участках (в зависимости от рода грибов). Если взять такой кусочек с нитями и поместить его в благоприятные условия, клетки активируются и скоро из нитей начнут расти грибы. Именно таким образом грибники часто собирают рассаду в лесах, чтобы потом посадить мицелий дома в заготовленный субстрат.

Мицелий грибов

Прежде чем перейти к ответу на вопрос, как получить мицелий грибов в домашних условиях, следует знать, что существует несколько видов этого материала.

  1. Мицелий маточный. Разводится в стерильных лабораторный условиях. В пробирках выводятся штаммы грибов, которые позже служат посевным материалом.
  2. Мицелий тела гриба. Посевным материалом служат кусочки спелых шляпок гриба, заготовленные по определенным правилам.
  3. Посевной мицелий. Уже практически готовый к засеву материал, собранный с отплодоносивших грибниц.

Выращивание мицелия грибов в домашних условиях

Если с готовым посевным мицелием все понятно (его требуется лишь заложить в субстрат для прорастания), то вот первые два вида материала нужно готовить. Чтобы вырастить маточный мицелий дома, необходимо будет купить некоторое специальное лабораторное оборудование. Также нужно проводить посев в стерильных условиях и с доступом к газу, воде, электричеству.

Выращивание мицелия грибов в домашних условиях

Технология выращивания маточного мицелия

  • пробирки, желательно с пробковыми закупорками;
  • пинцет;
  • спирт и горелка;
  • сусло;
  • перекись водорода;
  • агар-агар;
  • стерильные перчатки.

Все предметы, необходимые для процесса приготовления, и рабочую зону стерилизуют. Сначала готовят питательную среду для посева.

  1. Сусло смешивают с агаром и кипятят на огне до загустения.
  2. Заранее подготавливают кусочки грибов. Их надо обработать в перекиси водорода и сложить в стерильную емкость.
  3. Смесь сусла и агара разливают в стерильные пробирки и ставят их в наклонном положении до остывания. Весь процесс должен осуществляться в полной чистоте.
  4. Когда субстанция остынет и станет желеобразной, пинцетом в каждую пробирку кладут кусочек гриба. Пробку стерилизуют над спиртовой горелкой и закупоривают пробирку.
  5. Пробирки с посевом убирают в темное теплое место на 2 недели. По истечении этого срока материал готов к засеву в субстрат.

Проблема в том, что часто в домашних условиях не получается вывести маточный мицелий, так как недостаточно соблюдается стерильность условий. В пробирки попадают микроорганизмы, и все, что получается в итоге – разросшаяся в сосудах плесень или другие паразитирующие бактерии. Поэтому лучше не мучиться и купить уже готовый мицелий у тех, кто занимается разведением грибов профессионально.

При покупке мицелия убедитесь в качестве продукта: продавец обязан указать срок изготовления материала, условия длительность хранения. Обычно продукт может храниться до 3-4х месяцев, если правильно соблюдать среду.

Следующий способ, как выращивать мицелии грибов из тела, более простой.

Посевной мицелий из тела гриба

Лучше всего таким способом размножаются вешенки и опята.

  1. Для приготовления посевного материала соберите спелые шляпки грибов, желательно отобрать самые лучшие и крупные, без повреждений. Замочите их в чистой кипяченой воде на сутки.
  2. После слейте воду, а шляпки разомните в кашицу. Хранить такой продукт нельзя, поэтому сразу подготовьте среду для засева (субстрат или черенки).

Если грибы выращиваются на пеньках или черенках, то кашица закладывается в заранее сделанные прорези (углубления в дереве). В субстрат мицелий тела грибов помещается между слоями. Для прорастания грибов важно, чтобы весь инкубационный период сохранялась температура в районе +23-25ºC и высокая влажность там, где расположены мешки с субстратом или черенки.

Посевной мицелий из тела гриба

Другие варианты выращивания мицелия грибов в домашних условиях доступны, только если у вас в доме имеется мини-лаборатория с автоклавом и прочей специальной техникой, что маловероятно. Поэтому и описывать их тут смысла нет.

Палочки с мицелием

Сегодня очень популярны палочки с мицелием. Их продают специально для рассады на предприятиях, занимающихся разведением грибов, и в специальных магазинах.

Палочки с мицелием

Это обычные небольшие палочки лиственной древесины, зараженные мицелием. Они хранятся до 6 месяцев при комнатной температуре и влажности более 50%. Достаточно поместить такую палочку в питательную среду, и вскоре пойдут всходы грибов.

Многие, попробовав добыть мицелий грибов в домашних условиях, отказываются от затеи, предпочитая использовать готовый материал. Но если разведение грибов для вас хобби, обязательно попробуйте хотя бы раз самостоятельно вырастить грибницу.

Получение чистой мицелиальной культуры

На жидких средах выращивают микробиологически чистые мицелиальные культуры, предварительно выделенные из плодовых тел, спор съедобных грибов или субстрата, пронизанного мицелием гриба. Выделение чистой мицелиальной культуры и ее идентификация — важный этап, гарантирующий успех всей дальнейшей работы по культивированию мицелия.

Чистые культуры базидиомицетов могут быть выделены из плодовых тел, базидиоспор (путем их проращивания), из корней микоризообразующих растений или же из почвы, древесины и других субстратов, являющихся средой обитания этих грибов. Наиболее простым и удобным способом получения желаемых культур высших базидиальных грибов является выделение культур из плодовых тел или базидиоспор, если последние легко прорастают. Выделение культур из субстрата или микоризных окончаний корней, применяющееся для специальных исследований, малоэффективно, и идентификация полученных культур представляет большие трудности.

Выделение чистых культур из плодовых тел. При выращивании мицелия съедобных грибов на жидких средах обычно преследуется цель получения штаммов, характеризующихся быстрым и обильным ростом мицелия с высоким содержанием белка, независимо от качества плодоношения этих штаммов. В этом случае поиск продуцентов, как правило, ведется в природе. В случае же, если целью выращивания является получение регенеративного (посевного) мицелия для производства плодовых тел, необходимо проводить выделение чистой мицелиальной культуры из плодовых тел отселекционированных культивируемых рас, выращиваемых в теплицах.

В природе сбор плодовых тел лучше проводить в сухую погоду в период их массового появления. Следует выбирать молодые неповрежденные плодовые тела, так как они меньше инфицированы микроорганизмами. Хранить плодовые тела можно в течение 2—3 недель в холодильнике в полиэтиленовых мешочках.

Обработка плодовых тел. Плодовое тело следует осторожно очистить от прилипших растительных остатков, соскоблить почву с ножки, промыть в проточной и стерильной воде и положить на фильтровальную бумагу, чтобы оно просохло. Промывать плодовые тела нужно быстро, чтобы они не напитались водой. Плодовое тело можно простерилизовать, обтирая 96-градусным спиртом или погружая на несколько секунд в 1%-ный раствор сулемы, 3%-ный раствор перекиси водорода, раствор формалина (1 : 300); в последнем случае плодовое тело следует тщательно отмыть в воде и дать обсохнуть. Плодовое тело можно также быстро обжечь над пламенем горелки.

Выделение инокулюма. Предварительно обработанное одним из описанных выше способов плодовое тело разламывают и кусочек ткани из середины переносят стерильным скальпелем, ланцетом или копьем на питательную среду. Ни в коем случае нельзя обжигать инокулюм в пламени горелки! Выделение культуры производят из разных частей плодового тела — шляпки, ножки, места перехода шляпки в ножку, гимениального слоя. При выборе участка ткани нужно исходить из размеров и строения плодового тела. Лучше использовать самую толстую его часть. Для болетальных грибов особенно рекомендуется основание ножки. В некоторых случаях вокруг кусочков плодового тела из основания ножки появляются зачатки плодовых тел, как это наблюдается у белого гриба.

У грибов с мелкими и тонкими плодовыми телами культуру можно выделить путем посева кусочков из мелко нарезанных ножек или пластинок. Выделение культуры из гимениального слоя лучше проводить, когда плодовое тело молодое и шляпка не развернута или затянута снизу покрывалом; у болетальных грибов — пока трубочки гименофора еще закрыты. Целесообразнее отбирать внутренние, стерильные части грибной ткани. Выделение культуры идет более успешно, если брать крупные кусочки (0,5—1,5 см в диаметре).

Части плодового тела помещают на питательную среду в чашки Петри, чашечки для тканевых культур или пробирки. Расход среды при посеве на чашки для тканевых культур (диаметр 4—5 см) незначителен, в каждой такой чашке находится только один кусочек, что важно для предотвращения загрязнения. Кусочки плодового тела помещают сверху на агар или частично погружают в агаризованную среду. Инокулюм плохо выделяющихся видов лучше сначала на несколько дней поместить в чашку Петри на смоченную стерильной водой фильтровальную бумагу. Когда в такой влажной камере инокулюм покроется растущим мицелием, его переносят на питательную среду.

Смотрите так же:  Ветерана труда стоимость медали

Таким же образом рекомендуется производить выделение культуры у дереворазрушающих грибов. Во влажную камеру помещают тщательно отмытые разрезанные плодовые тела или же кусочки древесины, пронизанные мицелием гриба. Чашки с инокулюмом помещают в термостат при 20—25° С. При 26—28° и выше скорость выделения может замедляться. В жаркое время года чашки с инокулюмом на 1—2 дня помешают в холодильник при 4-5—10° С, а затем переносят в термостат. Желательно, чтобы относительная влажность воздуха была не ниже 80%, для чего в термостат можно поставить сосуд с водой.

Молодой растущий мицелий появляется на кусочках плодовых тел у разных видов в разные сроки: от нескольких дней до 3—4 недель. В последнем случае кусочек плодового тела лучше помещать сразу в пробирку, что предохраняет его от высыхания, или же заклеивать чашки лейкопластырем.

Выделение культур производят обычно на твердую среду: сусло-агар, солодовый агар, картофельно-глюкозный агар, мальц-агар и т. д. Если выделение идет плохо или мицелий не переходит с инокулюма на поверхность среды, в состав последней следует добавить дрожжевой автолизат, отвары коры, хвои или листьев различных высших растений (обычно в количестве от 0,1 до 5%), экстракты из плодовых тел грибов (4—5%).

Грибные экстракты готовят следующим образом: плодовые тела измельчают, заливают холодной водой так, чтобы она покрывала плодовые тела, и ставят на холод на сутки. После этого жидкость отфильтровывают и трижды стерилизуют текучим паром.

В чашке Петри вместе с колониями базидиальных грибов могут расти колонии плесневых грибов, дрожжей, бактерий, что обычно легко заметить. В таких случаях предполагаемые колонии базидиомицетов нужно последовательно пересеять с последующим микроскопическим контролем и избавиться от инфекции с помощью обычных методов микробиологической техники. Для подавления роста бактерий, загрязняющих грибные культуры, рекомендуется проводить выделение на подкисленный агар (pH 4,5—5,0), добавлять антибиотики или лучше их комбинации (пенициллин — 200 ед., стрептомицин — 100 ед. в 1 мл среды и др.).

Для выделения чистых культур базидиомицетов можно использовать также жидкие среды с набором витаминов и слабой концентрацией питательных веществ, раствор мальц-экстракта (0,8%). Жидкие среды бывают эффективны в тех случаях, когда не удается выделить культуру на агаризованную среду.

Легко выделяется культура таких грибов, как Pleurotus ostreatus (Fr.) Kumm., Armillariella mellea (Vahl.) Fr., Coprinus comatus (Fr.) S. F. Gray, Lepista nuda (Fr.) W. L. Smith, Clitocybe nebularis (Fr.) Quel, Macrolepiota procera (Fr ) Sing., Pholiota squarrosa (Fr.) Quel, и т. д., многих афиллофорзльных и гастеромицетсв. Кусочки плодовых тел таких грибов, помещенные на питательную среду или во влажную камеру, быстро покрываются растущим мицелием, бактериальное загрязнение незначительно. Кусочки плодовых тел Cantharellus cibarius Fr., видов Gomphidius обычно обильно зарастают бактериями.

Некоторые грибы, особенно из родов Lactarius и Russula, с трудом выделяются в культуру, несмотря на отсутствие бактериального загрязнения. О. Модесс и П. Микола приводят списки грибов, которые не растут в культуре. Однако весь вопрос, очевидно, заключается в умелом подборе оптимальных условий для их роста. Трудно выделяются в культуру и скудно растут на обычных средах многие виды Amanita, Cortinarius, Clitocybe vibescina, Pluteus atricapillus (Seer.) Sing., Tricholoma vaccinum (Pers. ex Fr.) Kumm., Tricholomopsis platyphylla и др. У группы так называемых приспособительных видов наблюдается медленный рост колонии вокруг инокулюма. К таким видам относят Agaricus silvaticus Seer., Calocybe gambosa, Tricholoma georgii Fr., Mycena poligrama (Bull, ex Fr.) S. F. Gray и др.

Следует иметь в виду, что разные штаммы одного и того же вида могут значительно отличаться по скорости роста и требованиям к питательной среде. По-разному проходит выделение в культуру в различное время года и из плодовых тел неодинакового возраста. По интенсивности роста в культуре могут отличаться и штаммы, выделенные из разных экологических условий, различных географических зон.

Выделение чистых культур из базидиоспор. В тех случаях, когда размеры, строение или консистенция плодовых тел не позволяют произвести выделение культуры, ее получают из базидиоспор. Этот способ используется и для проведения специальных биологических, в частности генетических исследований. Было также установлено, что культуры, полученные из базидиоспор, обладают некоторыми свойствами (например, противоопухолевой активностью), которые отсутствуют у культур, полученных из плодовых тел. Базидиоспоры большинства подстилочных сапрофитов, копрофильных, лигнофильных и других немикоризных грибов прорастают обычно легко. Проращивание же базидиоспор многих микоризообразователей представляет значительные трудности. Различными исследователями были пророщены споры микоризообразующих грибов из родов Amanita, Boletus, Cortinarius, Hydnum, Paxillus, Russula, Tricholoma и некоторых других.

Хранение и посев спорового материала, сроки прорастания. Проращивание базидиоспор производят или непосредственно после сбора плодовых тел, или же хранят споровую массу до посева. Плодовые тела гастеромицетов перед посевом или хранением следует высушить в течение нескольких дней при комнатной температуре неразрезанными. Недозрелые плодовые тела оставляют до созревания, о чем судят по побурению глебы.

Оптимальные сроки хранения спорового материла неодинаковы не только у разных видов, но и у базидиоспор, полученных от плодовых тел одного и того же вида. У видов рода Boletus споры прорастают как на 2—4-е сутки после сбора, так и после годичного хранения при низких температурах. У Calvatia gigantea Fr. оптимальный процент прорастания спор отмечен после 8—14 месяцев хранения при температуре от—18 до+12° С. Споры Schizophyllum commune Fr. прорастали после хранения в вакууме более чем 50 лет.

Посев базидиоспор производят в чашки Петри в виде однородной водной суспензии с определенной концентрацией спор на агаризованную среду (лучше глубинно). Успех прорастания зависит от правильной концентрации спор, которая подбирается для каждого вида и иногда для каждого плодового тела. У Calvatia gigantean оптимальная концентрация базидиоспор для разных плодовых тел лежит в пределах 1—43 млн. спор на чашку. Базидиоспоры грибов из рода Mecena прорастают хорошо при концентрации в чашке от нескольких сотен до нескольких тысяч. Споры Agaricus campestris лучше прорастают в массе, чем отдельные споры.

Можно производить посев базидиоспор и непосредственно из плодовых тел по методу Н. Фриза:

Плодовые тела собирают в день опыта или за день и тогда хранят в холодильнике при +3°С. Шляпку гриба с помощью вазелина прикрепляют под крышку пустой стерильной чашки Петри. Агаровую среду разливают в другие чашки, крышки которых поочередно на 5 мин заменяют крышкой с плодовым телом. За это время в чашку успевают попасть от нескольких сотен до нескольких тысяч базидиоспор. Если плодовые тела малы, то можно брать по несколько штук. В этом случае для получения однородного спорового материала желательно брать плодовые тела, произрастающие в одном месте.

По методу П. И. Клюшника для прорастания базидиоспор используют условия, близкие к природным. Свежесобранные базидиоспоры помещают между предметными стеклами и закапывают в почву на глубину около 5 см. Прорастание их у представителей разных родов и видов наступает в разные сроки. Из базидиоспор вырастает первичный мицелий, состоящий из тонких тонкостенных многоклеточных гиф. Появление заметных колоний происходит обычно в течение 30 дней, но у некоторых видов от высева спор на питательную среду до образования колоний проходит 2—3 месяца. У Mycena rosea 99—100% спор прорастают уже через 12 ч после посева; появление колоний из базидиоспор у видов рода Lycoperdon, Calvatia gigantea наблюдается через 30 дней. Процент всхожести у многих микоризообразующих грибов очень низок (0,001—1%).

Питательные среды. Для проращивания спор используют водный агар (2,5%), сусло-агар, мальц-агар, питательную кислую желатину, синтетические среды с тиамином и различные природные субстраты — экстракты плодовых тел грибов, дрожжей, листьев, хвои, почвы, навоза и т. д. Споры многих гименомицетов прорастают в присутствии экстракта пищеварительного тракта слизняка. Выбор подобных стимуляторов следует вести, основываясь на тех экологических условиях, в которых обитает гриб.

Стимулирующее действие на прорастание базидиоспор оказывают живые дрожжи, в частности Torula sanguinea. Инокуляция дрожжевой культурой проводится через 24 ч после посева спор гриба в чашки Петри. Прорастание базидиоспор некоторых видов сыроежек происходит только в присутствии живых корней высших растений, причем не только древесных, но и томата. Наличие живых корней стимулирует прорастание базидиоспор Suillus luteus, S. piperatus (Fr.) Kuntz.

При составлении синтетических сред для проращивания базидиоспор следует иметь в виду, что прорастание может тормозиться при высоком содержании питательных компонентов в среде. Установлено, что для спор многих базидиомицетов токсичны ионы аммония. Так, прорастание спор у видов рода Mycena подавляется при наличии в среде 0,1—0,5% виннокислого аммония. Прорастание базидиоспор может происходить и просто в воде, однако вода из водоемов, не подвергавшаяся стерилизации, и морская вода оказывают на их прорастание ингибирующее действие. Чтобы избежать бактериального загрязнения, в питательную среду так же, как при выделении культур из плодовых тел, добавляют антибиотики.

Смотрите так же:  141 приказ мвд россии

Температура, оптимальная для прорастания базидиоспор, может значительно варьировать у разных видов и разных штаммов в пределах вида. Температурный оптимальный интервал может изменяться в зависимости от состава питательной среды. Обычно оптимальные температуры для прорастания базидиоспор лежат в пределах 15— 30° С.

Для успешного прорастания многие базидиальные грибы — Раxillus involutus Fr. ex Batsch., Tricholoma equestre (Fr.) Quel., некоторые виды Flammulina, Marasmius, Agaricus, Lactarius и другие — требуют пониженных температур, как это имеет место в природе. После охлаждения споры должны быть перенесены в температурные условия, оптимальные для прорастания. Базидиоспоры некоторых копрофильных грибов, проходящих через пищеварительный тракт перед прорастанием в природных условиях, можно стимулировать предварительным нагреванием до температуры 37—40°С.

Свет необходим для прорастания преимущественно тем грибам, на которые оказывает стимулирующее действие предварительное охлаждение. Однако пока имеется очень мало экспериментальных данных по влиянию светового спектра и количества света на прорастание базидиоспор. Здесь важно правильно сочетать температуру и свет.

Влажность. Для прорастания базидиоспор необходимо поддерживать относительную влажность воздуха не ниже 80%. Для сохранения высокой влажности в чашках Петри рекомендуется помещать их в эксикатор или заклеивать лейкопластырем, изоляционной лентой, ставить сосуд с водой в термостат.

Активирование прорастания. Для преодоления периода покоя базидиоспор применяются различные средства: предварительное охлаждение или нагревание, чередование охлаждения и нагревания, чередование увлажнения и высыхания, физическое воздействие на споровую оболочку путем растирания базидиоспор с кварцевым песком, встряхивание суспензии спор с мелкими частицами стекла и т. д. Для активирования прорастания применяется также обработка базидиоспор различными химическими веществами. Из неорганических веществ употребляют серную, соляную, фосфорную и азотную кислоты, азотнокислый кальций, аммонийные соединения. С этой же целью используют этиловый и другие спирты, ацетон, хлороформ, бензин, альдегиды. К активаторам прорастания относятся органические кислоты — оксалаты, ацетаты, цитраты; аминокислоты — аланин, пролин, триптофан. К мощным стимуляторам прорастания базидиоспор относятся также поверхностно активные вещества. Органические вещества, такие как алифатические спирты и эфиры, активируют прорастание спор в концентрации более высокой (в 100—1000 раз), чем растворы гетероциклических соединений (фурфурол 1 : 1 000 000).

Получение мицелия в домашних условиях

Сам себе миколог. У грибоводов, особенно начинающих, часто возникает вопрос: а можно ли получить мицелий в домашних условиях? В принципе, ничего невозможного в этом нет, хотя занятие не из самых легких, хлопотное и требует наличия определенных знаний, умения, а также оборудования и материалов.

Первый шаг на этом пути — заражение подходящей среды. Для приготовления сред используют экстракты и отвары питательных природных субстратов, а также целый ряд сложных искусственных сред различного состава. Как правило, все они готовятся с использованием агар-агара, так как такая среда имеет целый ряд преимуществ. Например, на поверхности агар-среды очень легко заметить загрязнения основной культуры посторонними микроорганизмами. В этом случае они могут быть своевременно удалены и не представлять помехи дальнейшему процессу.

Для приготовления среды может использоваться любой из следующих составов.

Сусло-агар: 200 мл неохмеленного пивного сусла разводят в 400 мл воды, 20 г агар-агара расплавляют в 400 мл воды, слегка охлаждают и смешивают с растворенным суслом.

Картофельно-глюкозный агар: 200 г очищенного и нарезанного картофеля кипятят в 500 мл воды не менее 2 часов, расплавляют 17 г агар-агара в 500 мл воды, отвар картофеля процеживают в агар и добавляют 20 г глюкозы.

Овсяный агар: 75 г овсяной муки медленно нагревают в течение часа в 500 мл воды на водяной бане, 17 г агар-агара расплавляют в 500 мл воды и смешивают с процеженным овсяным отваром.

Морковный агар: экстракт моркови — 400 мл, вода — 600 мл, агар — 15 г. Измельченная морковь смешивается с водой в соотношении 2:5, отваривается в течение 30 минут, фильтруется.

Кроме приведенных примеров питательных сред имеется и ряд других. Чаще всего употребляется сусло-агар.

Чисто вымытую и высушенную посуду заворачивают в бумагу, колбы и пробирки затыкают ватно-марлевыми пробками, горлышки обвязывают бумажными колпачками. Стерилизуют посуду в автоклаве 15-20 мин при давлении 1 атм. или в сушильном шкафу при температуре 150°С в течение 2 часов. Затем по одному из вышеописанных рецептов готовят среду. Если в вашем распоряжении имеется универсальная лакмусовая бумага, нелишним будет проверить значение рН среды. В оптимальном случае этот показатель должен равняться 6,0. При наличии отклонений среду подкисляют либо подщелачивают.

Стерилизацию проводят в автоклаве при 1 атм. в течение 15-20 мин. После стерилизации среду слегка охлаждают, разливают в подготовленные пробирки и в чашки Петри. Чтобы при посеве не произошло бактериальное заражение, в среду добавляют антибиотики из расчета 200 ЕД пенициллина, 100 ЕД стрептомицина, 25-50 ЕД тетрациклина на 1 мл среды.

Вышеописанную процедуру можно упростить, приспособив её к домашним условиям. Для этого понадобятся вата, алюминиевая фольга, пробирки с закручивающимися колпачками (пробками), трубка для заполнения пробирок, мерная кружка, кастрюля-скороварка и два литровых сосуда с маленьким горлышком.

Ингредиенты среды смешиваются. Смесь заливается в каждый сосуд, который заполняется на 1/2-3/4 вместимости. Горлышко сосуда затыкается ватой и покрывается сверху алюминиевой фольгой. В качестве домашнего заменителя автоклава используют кастрюлю-скороварку, которую заполняют водой (уровень воды — около 1-2 см), вставляют каркас, призванный удерживать сосуды в вертикальном положении, а затем — сами сосуды. Кастрюлю закрывают крышкой и фиксируют крышку на своем месте. Нагрев ведут до тех пор, пока пар не начнет вырываться из клапана кастрюли. Спустя несколько минут клапан закрывают. Сосуды стерилизуют при температуре около 120°С в течение 15 минут. Нельзя позволять температуре подняться выше 121°С, так как это может вызвать карамелизацию и порчу среды. По истечении 15 минут нагрев прекращают и позволяют давлению в скороварке прийти в норму (это произойдет приблизительно через 45 минут). Тем временем с пробирок удаляют колпачки (если пробирки взять негде, можно вместо них использовать маленькие стеклянные баночки, например, из-под медпрепаратов), помещают пробирки в чистые жестяные банки (их используют для удобства, чтобы можно было одним движением переместить куда-либо сразу все пробирки) и располагают банки и колпачки на чистой рабочей поверхности. В помещении предварительно проводят влажную уборку, удаляя все пылинки. Как только сосуды со средой остынут настолько, что можно взять из скороварки при помощи полотенца или рукавиц, их вынимают и ставят рядом с пробирками. Сосуды встряхивают так, чтобы смесь хорошо перемешалась, убирают фольгу и вату. Пробирки через трубочку заполняют средой на 1/3. Затем пробирки прикрывают колпачками и помещают в жестяные банки. Их ставят в скороварку, температура вновь доводится до 120°С и выдерживается в течение 30 минут. Кастрюле снова дают время остыть, а давлению внутри нее — вернуться в норму.

Пробирки устанавливаются под углом к горизонтальной поверхности таким образом, чтобы обеспечить максимальную площадь поверхности среды для роста мицелия. Когда среда остынет, она превратится в плотное желе, и пробирки могут быть возвращены в вертикальное положение; поверхность среды при этом останется наклоненной под углом.

Если пробирки не используются немедленно, они могут храниться в холодильнике от недели до месяца. Однако в этом случае следует регулярно проверять их на наличие бактериальных или грибковых заражений.

Когда пробирки остынут, приходит время для первого шага, который требует особой осторожности. По возможности работу проводят в максимально свободном от грязи и пыли помещении. Все форточки и двери должны быть закрыты, чтобы исключить всякую вентиляцию воздуха. В помещении следует провести влажную уборку. Для достижения лучших результатов рекомендуется также обработать все его поверхности из распылителя раствором с 10% хлорным отбеливателем (например, «Белизной»).

Культуру грибов можно выделять как из плодовых тел, так и из спор. Для получения споровой культуры в качестве посевного материала используют споровый порошок, взвешенный в воде в виде суспензии. Споровый порошок выделяют из шляпки, приклеенной к крышке пустой стерильной чашки Петри.

В домашних условиях проще выделять культуру из плодового тела. Для её получения пользуются молодыми, неповрежденными плодовыми телами, тщательно очищенными от мусора. Поскольку на поверхности могут находиться бактерии и споры других грибов, используют внутреннюю ткань гриба, как правило, свободную от подобных загрязнений.

Скальпель или тонкий острый нож прокаливают на огне спиртовки. Можно также воспользоваться так называемой инокуляционной петлей. Её можно изготовить из обыкновенной вязальной спицы или стальной проволоки, загнув на 10 мм её конец и сточив его на нет. Гриб аккуратно разламывают на две половинки. Его помещают на стол разломанной поверхностью вверх и из верхней части ножки вырезают кусочки ткани примерно по 0,5 см. Для обеспечения стерильности их окунают в перекись водорода, а затем над пламенем горелки открывают пробирку с питательной средой и помещают на нее кусочек ткани гриба. Во избежание риска заражения всю операцию необходимо проводить настолько быстро, насколько это возможно. Ни пробирка, ни пробка не должны касаться рабочего стола — и то, и другое удерживают в руке. Пробирку необходимо удерживать в горизонтальном положении, чтобы посторонние частицы из воздуха не попадали в горлышко. Кусочек грибной ткани помещается на самый край горлышка. Пробирку закрывают предварительно обожженной над огнем пробкой. Теперь пробирку слегка встряхивают, чтобы поместить частицу гриба на поверхность питательной среды.

Смотрите так же:  Требования санпин по температуре в помещении

Повторите эту процедуру со всеми оставшимися пробирками и грибным материалом несколько раз, так как даже при осторожнейшей технике инокуляции возможно заражение посторонними микроорганизмами. В перерывах между инокуляцией пробирок каждый раз стерилизуйте скальпель или петлю в пламени горелки. Проверьте плотно ли закрыта пробка в пробирке. Обвяжите место её соприкосновения с горлышком медицинским бинтом. Бинт позволит «дышать» мицелию, но предотвратит заражение. Если требуется вырастить сразу несколько культур, то на данном этапе нужно подписать засеянные пробирки, чтобы избежать путаницы в дальнейшем.

И, наконец, пробирки помещают в затемненное место с постоянной температурой 13-22°С. Через несколько дней очертания грибной ткани станут нечеткими — начался рост мицелия, который спустя несколько недель полностью освоит поверхность агара. Если в пробирках замечают плесень (обычно определяется по наличию зеленых, черных или другого цвета спор), их незамедлительно отделяют от остальных, содержимое уничтожают, а пробирку и колпачок тщательно промывают теплой мыльной водой.

Агар в пробирке, содержащий мицелий гриба, является маточной культурой. Маточные культуры хранят при температуре 1-2°С, ежегодно пересевая на свежую питательную среду.

Если нужно размножить или поделиться культурой с другими грибоводами, то её переносят из одной пробирки в несколько. Это делают путем повторения процесса, описанного выше, только вместо кусочка ткани плодового тела гриба следует использовать частичку агара с проросшим мицелием.

Следующим шагом является разведение культуры гриба на промежуточном субстрате.

Для разведения культуры гриба на промежуточном субстрате часто используется зерно. Однако это вовсе не означает, что мицелий, пророщенный на зерне, будет самым лучшим, хотя такое мнение и довольно широко распространено. Мицелий, выращенный на смеси опилок, плодово-ягодного жмыха (особенно с примесью косточковых ягод), компоста и некоторых других компонентов, имеет как минимум несколько неоспоримых преимуществ — большую лёжкость, жизнестойкость и срок хранения. Так, зерновой мицелий можно хранить при температуре 0 — +2°С 2-3 месяца, а компостный — около года, причем температура хранения может быть значительно выше. Причина же широкого распространения зернового мицелия состоит в простоте работы с ним, особенно при массовой организации производства.

Поэтому дальнейшее описание будет посвящено технике получения именно зернового мицелия как наиболее известной, универсальной и отработанной.

Для обеспечения стерильности в момент инокуляции можно использовать микробиологическую лабораторию, общий вид которой показан на рисунке. Домашняя микролаборатория представляет собой герметично закрывающийся ящик с вмонтированным стеклом на верхней крышке, бактерицидной лампой и обычной лампой накаливания, прикрепленными к боковым стенкам, а также рукавами с резинками, расположенными на передней стенке. Имея такую микролабораторию и поддерживая в ней стерильность, можно проводить инокуляцию практически в любом помещении.

Для инокуляции промежуточного субстрата очень удобно использовать 0,33-литровые бутылки (из-под пива, лимонада). Преимущество бутылок в их маленьких горлышках. Это значительно снижает возможность постороннего заражения во время инокуляции. Правда, в дальнейшем это преимущество порождает и основной недостаток: проросший субстрат не так-то легко извлечь обратно. Использование банок с этой точки зрения является более практичным, однако для удачного применения необходимо использовать специальные фильтры.

Материалы, необходимые для процесса: скороварка, алюминиевая фольга, зерно. Под зерном обычно подразумевают семена различных злаковых культур — пшеницы, ржи, проса, сорго, овса, ячменя, кукурузы.

Для приготовления зернового мицелия в бутылках объемом 0,33 л понадобится 1/3 стакана зерна и 1/4 стакана воды. Можно использовать бутылку и другого объема. Надо лишь иметь в виду, что зерно в процессе стерилизации увеличится в объеме приблизительно вдвое. Поэтому бутылку не следует заполнять зерном более чем на 1/3.

Бутылки заполняют зерном и водой, помещают в скороварку и накрывают алюминиевой фольгой. Фольга предотвращает намокание пробки бутылки от конденсата. Зерно готовится при температуре 120°С в течение 7 минут. Когда скороварка немного остынет, бутылки вынимают и встряхивают так, чтобы зерно хорошенько перемешалось.

Затем их снова помещают в скороварку и «варят» в течение 45 минут при температуре 120°С (время, необходимое для разогрева скороварки до этой температуры, не учитывают). Правильно приготовленное зерно должно быть рассыпчатым, легко вытряхиваться. Переваренное зерно, приготовленное с излишком воды, часто разрывается, и крахмал, входящий в его состав, вызывает слипание отдельных зерен. Зерно, приготовленное в малом количестве воды, будет слишком твердым, ссохшимся и не пригодным для роста и развития мицелия.

Для некоторых видов грибов имеет весьма важное значение кислотность субстрата. В этом случае её можно регулировать путем добавления в субстрат известняка, гипса, мела. Шампиньон двуспоровый (Agaricus bisporous) — типичный представитель такого рода грибов. Наиболее оптимальное значение рН должно равняться 6.0.

Одна пробирка с мицелием на агаре используется для инокуляции многих бутылок, так как для каждой из них требуется лишь маленький кусочек мицелия. Вся техника схожа с ранее выполняемыми процедурами. Пробирка открывается одновременно с бутылкой, заполненной зерном, стерильным скальпелем частичка мицелия из пробирки переносится в бутылку. При этом пробирку лучше удерживать в горизонтальном положении во избежание попадания в нее пыли и загрязнений из воздуха. Обе емкости закрываются. Бутылки подписываются с указанием вида гриба и даты инокуляции.

По мере роста мицелия необходимо периодически встряхивать содержимое бутылки, чтобы ускорить процесс прорастания и предотвратить превращение зерна в плотную густую массу. Температуру поддерживают на уровне 20-25°С. После того как гриб полностью колонизирует зерно (субстрат зарастает в белый цвет), бутылки следует хранить в холодильнике при температуре 0-2°С.

Третьей и завершающей стадией культивирования грибов является их разведение на конечном субстрате и плодоношение. Обычно конечный субстрат не является зерновым, а используются компост, солома, древесина и т.д. Выбор субстрата варьируется в зависимости от вида гриба, способа выращивания и является темой для отдельного рассмотрения.

Выше была описана стандартная методика. Но наука не стоит на месте. Периодически появляются сообщения об использовании новых субстратов и новых методик. Заслуживает внимания технология, предложенная на основе многолетних экспериментов Рэнделом Уэйном (Randall R. Wayne). К сожалению, как и всякое другое новшество, данная информация является коммерческой и поэтому не доступна нам в полном объеме. Однако она может подсказать специалистам и любителям соответствующее направление в их экспериментах.

Рэнделом Уэйном за основу были взяты дезинфицирующие способности перекиси. Сначала стандартно готовится среда, дается время агару остыть до температуры, когда его можно свободно взять руками. Мерная пипетка стерилизуется либо выдерживается в кипящей воде в течение минуты, затем охлаждается. На один литр агар-среды добавляется 6-8 мл 3%-ной перекиси. Предварительно убеждаются, что раствор не потерял эффективности. Для этого достаточно добавить в него кусочек банана. Если раствор энергично вспенился, значит, все в порядке. Теперь, по утверждению автора, если после затвердения агара открыть пробирки и оставить их на открытом воздухе хоть на час, на агаре все равно не будут развиваться посторонние микроорганизмы. Уэйн утверждает, что работы по инокуляции субстрата можно проводить на открытом воздухе, стерилизуя лишь скальпель. Особенностью метода является то, что при получении мицелия непосредственно из спор необходимо предварительно вырастить мицелий на обыкновенном агаре, а уж затем смешивать его с агаром, содержащим перекись. При получении мицелия из части плодового тела инокуляцию можно проводить напрямую.

Добавление перекиси водорода предотвращает кислородное голодание развивающейся грибницы, так как в продуктах её разложения содержится кислород. Отличительной чертой перекиси является также и то, что она нейтрализует не только бактериальные заражения (как это делают антибиотики), но и грибковые.

Используя 3%-ную перекись водорода, возможно сведение к минимуму процесса стерилизации промежуточного и конечного субстрата. А это дает, во-первых, экономию времени, а во-вторых, возможность проведения всего цикла выращивания грибов без использования каких-либо специфических условий и приспособлений. Правда, для этого требуется применять специальный состав субстрата. Например, энзимы, содержащиеся в необработанных опилках, быстро разрушают перекись. Для того чтобы снизить степень их воздействия, опилки просушивают при температуре 150°С в течение нескольких часов или стерилизуют под давлением. Сам же Уэйн рекомендует использовать в качестве субстрата чистую газетную бумагу, картон, различные бумажные отходы, а также сено и аналогичные ему компоненты.

Что ж, теперь вы обладаете достаточной информацией, чтобы самим вырастить мицелий. Попробуйте — и у вас обязательно получится. Если же описанный процесс покажется слишком сложным, всегда можно обратиться к специалистам и приобрести уже готовый посадочный материал.

Другие статьи на эту тему читайте здесь.

Author: admin